省级医学论文发表期刊推荐及范文参考
发布时间：2014-12-10 16:34所属分类：临床医学论文浏览：1次加入收藏
无创肢体缺血预处理(noninvasive limb ischemic preconditioning，NLIP)是指通过上肢或下肢、单侧或双侧的短时间缺血预处理从而减轻远隔组织器官的缺血再灌注(ischemia- reperfusion，IR)损伤。 省级医学论文发表 期刊推荐 《福建中医药》 杂志是由福建省卫
无创肢体缺血预处理(noninvasive limb ischemic preconditioning，NLIP)是指通过上肢或下肢、单侧或双侧的短时间缺血预处理从而减轻远隔组织器官的缺血再灌注(ischemia- reperfusion，IR)损伤。省级医学论文发表期刊推荐《福建中医药》杂志是由福建省卫生厅主管，福建中医学院主办的医药类学术期刊。杂志曾于1992年获得全国中文核心期刊称号。本刊自1956年创刊以来， 坚持中医特色，注重临床实践、内容丰富实用，深受读者、作者的喜爱，在国内外享有较高声誉。是广大读者、作者获取学术信息，开展学术交流的园地。
[摘要] 目的 探讨无创肢体缺血预处理快速相与延迟相叠加对大鼠皮瓣缺血再灌注(IR)损伤的影响。 方法 选择200～300 g健康雄性SD大鼠48只，将其随机分成单纯IR组、快速相(EPC)组、延迟相(DPC)组、EPC与DPC叠加(EDPC)组，每组各12只。通过实验设计建立动物模型，观察对比各组皮瓣IR后血清LDH、MDA、GSH-Px、SOD变化情况以及皮瓣存活率。 结果 EDPC组的MDA、LDH含量明显低于其他3组(P<0.05)，而GSH-Px、SOD及皮瓣成活率明显高于其他3组(P<0.05)。 结论 无创肢体缺血预处理快速相与延迟相叠加对大鼠IR皮瓣具有保护作用且优于单一的快速相或延迟相的作用。
[关键词] 省级医学论文发表,肢体缺血预处理,快速相,延迟相,缺血再灌注,皮瓣,大鼠
目前研究认为，NLIP对大鼠的许多脏器具有确切的早期和延迟保护作用[1-3]，即快速相(early preconditioning，EPC)和延迟相(delayed preconditioning，DPC)。EPC主要是由于缺血、缺氧等直接剌激机体释放腺苷等保护性介质[4-5]，其保护作用在预处理后数分钟内出现，持续2～3 h，而DPC主要是NLIP激活复杂的信号传递链，最终导致心脏保护基因翻译的增加[6-7]，其保护作用在预处理12～24 h出现，作用强度弱，但时间持续3～4 d。EPC和DPC的效应特点及机制不尽相同，特别是产生时间不同，本研究通过在大鼠NLIP24 h后再施加1次NLIP，实现大鼠NLIP的EPC效应和DPC效应重叠，探讨两时相叠加对大鼠IR皮瓣的保护作用。
1 材料与方法
1.1 实验动物和分组
200～300 g健康雄性SD大鼠48只，体重在270～330 g，由福建医科大学动物实验中心提供，在福建省立医院动物实验室分笼喂养，每笼4只，每天给予标准饲料，清洁自来水自由饮用。动物房环境温度 22～24℃，相对湿度70%左右，实验前饲养1周以熟悉环境。
1.2 实验分组
将所有动物按体重进行编号，根据随机数字表法随机分成4组，每组12只。单纯IR组：分离皮瓣并实施缺血6 h/再灌注8 h(IR)处理，但未进行NLIP;快速相(EPC)组：实施阻断/开放右后肢血流各5 min连续3次循环(NLIP)，30 min后立即对皮瓣实施IR处理;延迟相(DPC)组：实施NLIP24 h后对皮瓣实施IR处理;快速相与延迟相叠加(EDPC)组：实施NLIP24 h后再实施1次NLIP，30 min后对皮瓣实施IR处理。
1.3 肢体缺血预处理(LIP)模型的建立
参考张连元等 [8]的方法，多功能监护仪监测大鼠右后肢脉搏波，将缠绕了橡皮筋的塑料管套入大鼠右后肢并尽量推向后肢根部，然后将橡皮筋从管上退下。由于橡皮筋的弹性回缩，会紧紧地结扎在大鼠右后肢根部，压迫了股动脉而阻断右后肢血流，当大鼠右后肢缺血5 min后，剪断橡皮筋恢复右后肢血流灌注5 min。以监护仪显示的右后肢脉搏波消失为阻断血流成功，以脉搏波恢复为血流恢复。如此反复实施肢体IR 3个循环为1次NLIP。
1.4 皮瓣IR模型的建立
按Petry等[9]描述的方法，术前禁食6 h，自由饮水。采用腹腔内注射10% 水合氯醛(0.3 ml/100 g)麻醉，取仰卧位固定于实验台上，腹部去毛，于左下腹设计1个以腹壁浅血管为蒂的轴形皮瓣，大小为6 cm×3 cm。充分游离腹壁浅血管至其在股动静脉发出点，游离发出点近端的股动静脉，原位缝合皮瓣备用。因腹壁浅血管极细小，极易被手术器械损伤，根据Petry 等[9]的描述，本研究用无损伤血管夹阻断腹壁浅血管的近端血管股动静脉血流，造成腹壁浅血管支配皮瓣的缺血，在缺血期间每2小时按0.15 ml/100 g腹腔内追加注射10%水合氯醛以维持大鼠麻醉状态。6 h后松开止血夹恢复血流灌注8 h完成1次IR。以监护仪显示的左后肢脉搏波消失为阻断血流成功，以脉搏波恢复为血流恢复。
1.5设备与试剂
PM9000型多功能监护仪(迈瑞医疗国际公司)，谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)测试盒、丙二醛(MDA)测试盒、乳酸脱氢酶(LDH)测试盒、总超氧化物歧化酶(SOD)测试盒，以上测试盒均由南京建成生物工程研究所提供。
1.6 血清酶学检测
每实验组随机抽取6只大鼠在IR后即刻经颈内动脉抽取3～5 ml血液，放37℃恒温箱静置1 h后，3000 r/min，离心5 min，分离血清进行检测。严格按照产品说明书操作，检测血清LDH、MAD、SOD、GSH-Px。
1.7 皮瓣成活率检测
其余6只大鼠在IR后第7 天，用数码相机进行皮瓣照相后，使用Image-Pro Plus 6.0图像分析系统计算皮瓣成活率：皮瓣成活率(%)=皮瓣成活面积/皮瓣总面积×100%。皮瓣坏死标准：皮瓣色泽变黑、表面黑色结痂，质地坚硬，弹性消失，切割组织不出血。
1.8 统计学方法
数据采用SPSS 17.0软件进行统计学处理，计量资料以均数±标准差(x±s)表示，采用单因素方差分析，以P<0.05为差异有统计学意义。
2 结果
2.1 4组血清GSH-Px和SOD活力、MDA和LDH含量的比较 与IR组比较，EPC、DPC、EDPC组的GSH-Px和SOD活力均升高，血清LDH、MDA含量均降低(P<0.05或 P<0.01);其中，EDPC组的GSH-Px和SOD活力最高(P<0.05)，其次为EPC组;EDPC组的血清LDH、MDA含量最低(P<0.05)，EPC组略低于DPC组(P>0.05)(表1)。
表1 4组血清GSH-Px和SOD活力、MDA和LDH含量的
比较(x±s，n=6)
与IR、DPC组比较，*P<0.05，与IR、EPC、DPC组比较，#P<0.05
2.2 4组皮瓣成活率的比较
EDPC组的皮瓣成活率[(84.30±7.53)%]明显高于其他3组(P<0.05或P<0.01)，而IR组的皮瓣成活率 [(31.69±15.19)%]最低(P<0.01)，EPC组[(69.41±11.53%)]虽略高于DPC组 [(67.23±10.50)%]，但差异无统计学意义(P>0.05)(图1)。
3 讨论
1986年Murry等 [10]在心脏实验中发现短暂的心肌缺血能够对随后长时间缺血的心肌起保护作用，并把这一现象命名为缺血预处理(ischemic preconditioning，IPC)，此后IPC在动物实验和临床上不断得到证实，但这种直接在脏器上进行的IPC不仅操作困难，同时也是对脏器的一种损伤，1996年Gho等[11]发现将小肠或者肾脏缺血15 min，对冠状动脉阻闭60 min的心肌也有保护作用，可显著缩小心肌梗死面积，这一发现将IPC的保护作用从同一器官延伸到不同器官，表明IPC是机体对缺血性损伤的整体性反应，而不是局限性反应。现将这种非直接对IR损伤的器官或组织进行IPC的方式称为远程缺血预适应(remote ischemic preconditioning，RPC)。Oxman等[12]在1997年研究发现下肢IPC后对IR的心肌亦具有保护作用，这一现象同样属于RPC 的一部分，但因对肢体进行的IPC，具有更简便，无创的特点，故又被称之为NLIP，其可通过对非重要脏器的短暂缺血而减轻重要生命器官的IR损伤，且操作简单易行，具有较大的临床应用价值。2002年Küntscher等[13]通过观察IR后大鼠腹部皮瓣，发现LIP亦能明显改善皮瓣的成活率，此后，皮瓣IR模型因制备简单，逐渐成为研究LIP特点及机制最简便、最常用的动物模型。
既往研究表明，IPC的保护作用存在两个时相：EPC和 DPC。EPC在预处理后数分钟内出现，保护作用较强，只持续2～3 h，而DPC在预处理12～24 h出现，作用强度弱，但时间持续3～4 d，因而具有更重要的临床意义。2005年Loukogeorgakis等[14]报道RPC对人体内皮IR损伤可产生早期和晚期阶段的保护作用，说明 RPC的保护作用也具有快速相和延迟相两个时相，两时相出现时间相距12～24 h。本研究通过两次相距24 h的NLIP实现LIP快速保护作用和延迟保护作用的重叠，实验发现EPC与DPC叠加处理后皮瓣的成活率明显比单独的EPC、DPC高，表明NLIP的 EPC与DPC实现了叠加，并产生了强于单独EPC或DPC的保护作用。
IR和氧化应激密切相关，LIP机制中减轻远隔脏器氧源损伤是一个重要方面，本研究也在氧化/抗氧化机制方面进行探讨。IR损伤导致活性氧(reactive oxygen species，ROS)等氧自由基大量产生，抗氧化酶如GSH-Px和SOD等的活性降低，组织中脂质过氧化严重，MDA含量增加。LDH存在于所有组织细胞中，是参与糖无氧酵解的重要酶，在IR损伤过程中，LDH作为损伤指标能反映组织细胞的受损程度。本研究中EPC、DPC组的大鼠血清GSH- Px、SOD的活力明显高于IR组，而LDH和MDA的含量明显降低，表明EPC、DPC均能有效提高机体清除氧自由基的能力，保护组织细胞膜结构和功能的完整，此结果与既往的大量研究相似，而本研究中的EDPC组大鼠血清的GSH-Px、SOD的活力明显高于EPC、DPC、IR组，而LDH和MDA的含量亦明显低于其他3组，进一步证实两次间隔24 h的NLIP能实现快速保护作用和延迟保护作用的叠加，能更有效提高机体清除氧自由基的能力，产生更强的保护作用。EPC主要是由于缺血、缺氧等直接剌激机体释放腺苷、一氧化氮、缓激肽、去甲肾上腺素等介质及诱发神经反射[4-5，15]，通过扩张血管、清除自由基、抑制炎症反应等机制起到保护心肌的作用，而DPC主要是IPC诱导了一氧化氮合成酶、环氧合酶-2、抗氧化酶和热休克蛋白等保护性蛋白质的合成，通过激活复杂的信号链而触发预适应，最终导致心脏保护基因翻译的增加[6-7，16]。本研究认为EPC与DPC的作用机制不同，且EPC起效仅需数分钟，在DPC起效，即保护性蛋白质合成后，第2 次的NIPC可刺激机体再次迅速释放保护性介质及诱发神经反射，通过扩张血管、清除自由基及抑制炎症反应等机制进一步加强保护作用，从而实现快速保护作用和延迟保护作用的叠加，产生更强的保护作用。
综上所述，NLIP的EPC与DPC能实现叠加，且两时相叠加后对皮瓣的保护作用明显优于单纯EPC或DPC，但其作用机制仍未明确，有待进一步研究证实。
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