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发布时间：2013-11-23 09:43所属分类：药学论文浏览：1次加入收藏

本文是一篇药学论文范文，选自核心医学期刊《临床误诊误治》，由月期刊网提供，另外，月期刊网给大家提供 论文指导 服务及一些列论文服务。临床误诊误治杂志为中国科技论文统计源期刊、中国科技核心期刊、中国期刊方阵双效期刊、中国生物医学核心期刊、

　　本文是一篇药学论文范文，选自核心医学期刊《临床误诊误治》，由月期刊网提供，另外，月期刊网给大家提供论文指导服务及一些列学术咨询服务。临床误诊误治杂志为中国科技论文统计源期刊、中国科技核心期刊、中国期刊方阵双效期刊、中国生物医学核心期刊、中国学术期刊综合评价数据库统计源期 刊、中国核心期刊遴选数据库收录期刊及中华医院管理学会临床误诊误治研究会期刊。
　　摘要:目的建立高效液相色谱法测定人血浆中全反式维甲酸浓度。方法色谱柱为SupelcosilLC18DB柱（5μm,4.6mm×250mm）；流动相为甲醇水冰乙酸(体积比82∶17∶1)；柱温为室温；流速1.5mL・min-1；检测波长为340nm。结果全反式维甲酸血药质量浓度在10～1000ng・mL-1范围内，与峰面积比有良好的线性关系（r=0.9997），最低检测浓度为2.5ng・mL-1。平均方法回收率为（94.5±4.7）%（n=15）。日内RSD≤4.1%，日间RSD≤6.2%。结论本方法简单、快速、灵敏、重现性好，适用于全反式维甲酸临床血药浓度监测及人体药代动力学研究。

　　关键词:全反式维甲酸,血药浓度,高效液相色谱法

　　全反式维甲酸(alltransretinoicacid,ATRA)是维生素A的天然氧化代谢产物，可抑制白血病细胞的增殖，诱导白血病细胞分化成熟，是目前治疗急性早幼粒细胞白血病(APL)的有效药物。ATRA对APL初发患者完全缓解率可达85％以上，但对复发患者再次应用ATRA则效果不佳，其原因可能是ATRA对参与其代谢的酶活性具有自身诱导作用，持续用药导致血药浓度逐步降低［1］。本文参考文献［2-4］，建立了一种灵敏、准确的ATRA血药浓度HPLC测定法，旨在为全反式维甲酸临床血药浓度监测及人体药代动力学研究提供测定方法。

　　1材料与方法

　　1.1仪器

　　Waters高效液相色谱仪（515型恒流泵，486型紫外检测器，Millennium32色谱工作站）；XW―80A旋涡混合器（上海医科大学仪器厂）；3K18高速冷冻离心机（Sigma）；高速离心机（美国雅培公司TDx仪附件）。

　　1.2药品与试剂

　　ATRA对照品(Sigma,纯度：98％)，阿维A酸（内标，罗氏公司），甲醇为色谱纯试剂，其余试剂均为分析纯。

　　1.3色谱条件

　　色谱柱为SupelcosilLC18DB柱（5μm，4.6mm×250mm）；柱温为室温。流动相：甲醇水冰乙酸（体积比82∶17∶1）；流速1.5mL・min-1。检测波长340nm。

　　1.4血药浓度测定法

　　1.4.1ATRA对照溶液配制

　　精密称取ATRA对照品适量，以甲醇溶解并定容，制得浓度为100μg・mL-1的ATRA储备液。将ATRA储备液以甲醇稀释，配制浓度分别为0.5、1、2.5、5、10、25、50μg・mL-1的ATRA对照溶液。

　　1.4.2内标液配制

　　取内标阿维A酸适量，置于100mL量瓶中，以甲醇溶解并定容，制得浓度为7.5μg・mL-1的内标液。

　　1.4.3样本处理

　　精密吸取血浆样品1mL，置10mL具塞离心试管中，加入内标溶液20μL，旋涡混合30s。加入1mol・L-1的HCl溶液500μL，漩涡混合30s，再加入乙酸乙酯3mL，旋涡混合1min，4500r/min离心5min。转移上层液至尖底试管中，于37℃水浴中氮气流吹干。残渣加入流动相200μL漩涡混合30s使溶解，10000r/min离心5min，取上清液50μL进样，记录色谱图，以ATRA峰面积（As）与内标峰面积（Ai）之比代入标准曲线计算ATRA血药浓度。

　　1.4.4标准曲线

　　精密量取空白血浆1mL，置10mL具塞离心管中，分别加入不同浓度ATRA对照溶液20μL，混匀，使血药浓度分别为10、20、50、100、200、500、1000ng・mL-1。按样本处理方法操作，以不同浓度ATRA系列溶液的As和Ai来计算A（A=As/Ai），以A值为纵坐标，ATRA质量浓度(ρ)为横坐标进行直线回归。

　　1.4.5回收率及精密度

　　分别于1mL空白血浆中加入低、中、高3种浓度的ATRA对照溶液20μL，混匀，使其浓度分别为10、200、1000ng・mL-1，按样本处理方法操作，计算ATRA血药浓度，以测得浓度与配制浓度之比计算方法回收率。另以甲醇配制相应系列浓度的ATRA溶液，不经提取直接测定，以此为标准，将两组峰面积相比，计算ATRA萃取回收率。以1d内测得的ATRA浓度计算日内精密度，以1周内5次测定的ATRA浓度计算日间精密度。

　　2结果1色谱行为

　　在上述色谱条件下，ATRA与内标物及血浆内源性物质能够较好分离，ATRA与内标的保留时间分别为8.8min和6.7min。空白血浆及血浆样品色谱图见图1。2线性范围

　　ATRA血药质量浓度(ρ)在10～1000ng・mL-1范围内，与峰面积比(A)有良好线性关系，其回归方程为：A=00116ρ+0.0036，r=0.9997。以信噪比S/N=3：1计，ATRA最低检测浓度为2.5ng・mL-1。3回收率及精密度

　　高、中、低3种浓度的提取回收率分别为（84.6±5.2）%、（81.2±6.3）%、（81.6±4.6）％，平均方法回收率为（94.5±4.7）%（n=15）。3种浓度的日内RSD≤4.1%，日间RSD≤6.2%。结果见表1。表1回收率及精密度（略）

　　3讨论

　　本文建立了一种灵敏、准确的ATRA血药浓度高效液相色谱测定法，适用于APL病人ATRA血药浓度的常规监测及临床药代动力学研究。通过监测ATRA血药浓度，可以更好地了解在某些APL病人连续用药治疗中临床复发及耐药的原因。

　　ATRA化学性质活泼，见光易异构化或氧化降解，因此在样品提取过程中应特别注意避光操作。提取过程中血浆加入1mol・L-1HCl溶液，使血浆酸化，可提高萃取回收率，乙酸乙酯一步萃取可使萃取回收率达到80％以上。

　　由于ATRA中的羧基可以与色谱柱中的硅醇基等发生相互作用，导致色谱峰拖尾，在流动相中加入1％(ω)醋酸，可抑制这种作用，消除ATRA峰拖尾现象。

　　参考文献:

　　［1］MUINDIJ,FRANLCELSR,MILLERWH,etal.Continuoustreatmentwithall-transretinoicacidcausesaprogressivereductioninplasmadrugconcentrations:implicationsforrelapseandretinoid"resistance"inpatientswithacutepromyelocyticleukemia［J］.Blood,1992,79:299.

　　［2］余自成，姚帅，郁人海.高效液相色谱法同时检测人血清中全反式及13-顺式维甲酸浓度［J］.药物分析杂志，2000，20(4):226.

　　［3］MICHIKOM,HIROKAZUY,HARUKO,etal.Simultaneousquantificationofretinol,retinal,andretinoicacidisomersbyhighperformanceliquidchromatographywithasimplegradiation［J］.JChromatogrB,2001，757:365.

　　［4］CARSTENKS,ABRAHAMB,HEINZN.Chromatographicanalysisofendogenousretinoidsintissuesandserum［J］.AnalBiochem,2003,315:36.

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