核心医学期刊投稿珠子参叶化学成分研究
发布时间：2014-06-11 15:05所属分类：临床医学论文浏览：1次加入收藏
珠子参叶，亦称汉中参叶，为五加科植物珠子参PanaxjaponicusC.A.Mey.var.major（Burk）C.Y.WuetK.M.Feng的干燥带茎叶。其原植物珠子参主要分布在我国四川、云南、陕西、湖北等省，又名扣子七、钮子七、珠儿参，为秦巴山区特色中药太白七药中的一种。 [摘要]
珠子参叶，亦称汉中参叶，为五加科植物珠子参PanaxjaponicusC.A.Mey.var.major（Burk）C.Y.WuetK.M.Feng的干燥带茎叶。其原植物珠子参主要分布在我国四川、云南、陕西、湖北等省，又名扣子七、钮子七、珠儿参，为秦巴山区特色中药“太白七药”中的一种。
[摘要]研究珠子参叶的化学成分。采用硅胶，SephadexLH-20，ODS柱色谱和半制备型高效液相色谱等方法进行分离纯化，根据理化性质和波谱数据分析鉴定了7个化合物的结构5，7-二羟基-8-甲氧基黄酮（1）、人参皂苷Rs2（2）、西洋参皂苷Rl（3）、人参皂苷Rs1（4）、三七皂苷Fe（5）、人参皂苷Rd2（6）和gypenosidenIX（7）。化合物1为首次从人参属植物中分离得到，2～7均为首次从该植物中分离得到。
[关键词]核心医学期刊投稿,珠子参,化学成分,黄酮,皂苷
珠子参叶作为民间药，具有清肺止咳、生津、润喉、防暑、滋补强壮等功效。在民间多用其泡茶饮，用以保护嗓音[1]。自20世纪80年代起，作为人参属的同属植物，珠子参的根茎及其叶子被人们予以广泛研究。经前人化学研究发现，珠子参叶中主要化学成分多为达玛烷型三萜皂苷[2-5]，有着极高的开发和利用价值。鉴于秦巴山区有着丰富的珠子参叶资源，为了更合理的开发利用珠子参叶，作者对其化学成分进行了进一步研究，从其乙醇提取物中分离得到7个化合物，运用现代波谱技术和化学方法分析鉴定了它们的结构，分别是5，7-二羟基-8-甲氧基黄酮（1）、人参皂苷Rs2（2）、西洋参皂苷Rl（3）、人参皂苷Rs1（4）、三七皂苷Fe（5）、人参皂苷Rd2（6）和gypenosidenIX（7）。其中，化合物1为首次从人参属植物中分离得到，2～7均为首次从该植物中分离得到。
1材料
XT5显微熔点测定仪（温度未校正，北京科仪电光仪器厂）；WFH-203三用紫外分析仪（上海精科实业有限公司）；BurkerAVANCE500型核磁共振波谱仪（瑞士Burker公司）；Quatrro质谱仪（Micromass公司）；LC3000型高效液相色谱仪（北京创新通恒），YMC-PackProC18半制备色谱柱（10mm×250mm，5μm）；D-10l大孔吸附树脂（天津南开大学化工厂）；柱色谱硅胶（100～200，200～300目）和薄层色谱用硅胶G（青岛海浪硅胶干燥剂厂）；ODS（日本YMC公司）、SephadexLH-20柱（Pharmacia公司）；预制硅胶板HSGF254（烟台市芝罘黄务硅胶开发试验厂）；RP-18高效薄层预制板（德国Merck公司）。本实验所用试剂均为天津科密欧公司分析纯和色谱醇产品。
药材于2011年8月采于陕西眉县太白山北坡，经陕西中医学院生药教研室王继涛高级实验师鉴定为珠子参P.japonicusvar.major的叶，植物标本现保存于陕西中医学院标本馆，标本号ZZS201108。
2提取与分离
珠子参干燥叶5kg，用8倍量70%乙醇回流提取3次，每次1.5h。合并提取液，减压浓缩得浸膏700g。提取物以适量蒸馏水溶解，经D-101大孔吸附树脂（2kg）柱色谱吸附，依次用水，30%，70%，95%乙醇洗脱，收集70%乙醇洗脱部分蒸干得浸膏105g。取其中80g，采用硅胶柱色谱分离，以氯仿-甲醇-水（1∶0∶0～0∶1∶1）梯度洗脱，经TLC检测合并流分，共得到10个组分（A～J）。将组分A（3.12g）进行硅胶柱色谱分离，以石油醚-乙酸乙酯（1∶0～0∶1）梯度洗脱，得Fr.A-1～Fr.A-5。采用SephadexLH-20凝胶色谱柱对Fr.A-3（1.17g）分离纯化，以氯仿-甲醇（1∶1）洗脱，得Fr.A-3-1～Fr.A-3-6。其中，Fr.A-3-3（235mg）经HPLC制备（85%甲醇），得到化合物1（65mg）。组分I（12.50g）经硅胶柱色谱分离，以氯仿-甲醇-水（8∶2∶1～6.5∶3.5∶1）梯度洗脱得Fr.I-1～Fr.I-7。Fr.I-4（4.60g）经ODS开放柱色谱（甲醇-水40∶60～75∶25），得Fr.I-4-1～Fr.I-4-6。其中，Fr.I-4-5（560mg）经HPLC制备（60%甲醇），得到化合物2（86mg）。Fr.I-6（3.40g）经ODS开放柱色谱（甲醇-水40∶60～85∶15），得Fr.I-6-1～Fr.I-6-7。其中，Fr.I-6-4（834mg）经HPLC制备（60%甲醇），得到化合物3（12.5mg）；Fr.I-6-6（658mg）经HPLC制备（60%甲醇），得到化合物4（67mg）。组分H（7.80g）经硅胶柱色谱分离，以氯仿-甲醇-水（10∶1∶1～7∶3.5∶1）梯度洗脱得Fr.H-1～Fr.H-6。Fr.H-4（2.30g）经ODS开放柱色谱（甲醇-水40∶60～85∶15），得Fr.H-4-1～Fr.H-4-5。其中，Fr.H-4-3（325mg）经HPLC制备（68%甲醇），得到化合物5（25mg）。其中，Fr.H-4-4（658mg）经HPLC制备（65%甲醇），得到化合物6（67.3mg）和化合物7（23.5mg）。
3结构鉴定
化合物1黄色无定形粉末（甲醇），mp203～205℃。盐酸-镁粉反应呈阳性，Molish反应呈阴性，10%硫酸-乙醇显黄色。ESI-MSm/z307[M+Na]+，283[M-H]-；1H-NMR（Pyr-d5，500MHz）δ：3.9（3H，s，8-OCH3），6.3（1H，s，H-3），10.8（1H，brs，7-OH），12.5（1H，s，5-OH）；13C-NMR（Pyr-d5，125MHz）δ：163.0（C-2），105.1（C-3），182.0（C-4），156.2（C-5），99.1（C-6），157.4（C-7），127.8（C-8），149.6（C-9），103.8（C-10），130.8（C-1′），129.3（C-2′），126.3（C-3′），122.0（C-4′），126.3（C-5′），129.3（C-6′），61.1（8-OCH3）。以上数据与文献[6]中数据一致，故鉴定5，7-二羟基-8-甲氧基黄酮。化合物2白色无定形粉末（甲醇），mp210～212℃。Liebermann-Burchard和Molish反应呈阳性，10%硫酸-乙醇显紫红色。ESI-MSm/z1126[M+Na]+，1102[M-H]-；1H-NMR（Pyr-d5，500MHz）δ：0.85（3H，s，19-Me），0.96（3H，s，18-Me），0.98（3H，s，30-Me），1.11（3H，s，29-Me），1.30（3H，s，28-Me），1.63（3H，s，26-Me），1.65（3H，s，21-Me），1.68（3H，s，27-Me），2.03（3H，s，CH3CO-），4.93（1H，d，J=7.6Hz，Glc1-H-1），5.15（1H，d，J=7.6Hz，Glc2-H-1），5.34（1H，brt，J=6.7Hz，H-24），5.39（1H，d，J=7.7Hz，Glc3-H-1），5.68[1H，d，J=1.6Hz，Ara（f）-H-1]；13C-NMR（Pyr-d5，125MHz）数据见表1。以上数据与文献[7]中数据一致，故鉴定为人参皂苷Rs2。
化合物3白色无定形粉末（甲醇），mp216～218℃。Liebermann-Burchard和Molish反应呈阳性，10%硫酸-乙醇显紫红色。ESI-MSm/z1156[M+Na]+，1132[M-H]-；1H-NMR（Pyr-d5，500MHz）δ：0.85（3H，s，19-Me），0.99（3H，s，18-Me），1.00（3H，s，30-Me），1.15（3H，s，29-Me），1.32（3H，s，28-Me），1.65（3H，s，26-Me），1.69（3H，s，21-Me），1.69（3H，s，27-Me），2.03（3H，s，CH3CO-），4.96（1H，d，J=7.6Hz，Glc1-H-1），5.03（1H，d，J=7.0Hz，Glc2-H-1），5.17（1H，d，J=7.8Hz，Glc4-H-1），5.34（1H，brt，J=7.1Hz，H-24），5.41（1H，d，J=7.7Hz，Glc3-H-1）；13C-NMR（Pyr-d5，125MHz）数据见表1。以上数据与文献[8]中数据一致，故鉴定为西洋参皂苷R1。
化合物4白色无定形粉末（甲醇），mp205～207℃。Liebermann-Burchard和Molish反应呈阳性，10%硫酸-乙醇显紫红色。ESI-MSm/z1126[M+Na]+，1102[M-H]-；1H-NMR（Pyr-d5，500MHz）δ：0.84（3H，s，19-Me），0.98（3H，s，18-Me），1.00（3H，s，30-Me），1.12（3H，s，29-Me），1.28（3H，s，28-Me），1.60（3H，s，26-Me），1.65（3H，s，21-Me），1.65（3H，s，27-Me），2.03（3H，s，CH3CO-），4.92（1H，d，J=7.6Hz，Glc1-H-1），4.95[1H，d，J=6.1Hz，Ara（p）-H-1]，5.12（1H，d，J=7.8Hz，Glc2-H-1），5.32（1H，brt，J=7.0Hz，H-24），5.37（1H，d，J=7.7Hz，Glc3-H-1）；13C-NMR（Pyr-d5，125MHz）数据见表1。以上数据与文献[7]中数据一致，故鉴定为人参皂苷Rs1。
化合物5白色无定形粉末（甲醇），mp185～186℃。Liebermann-Burchard和Molish反应呈阳性，10%硫酸-乙醇显紫红色。ESI-MSm/z939[M+Na]+，915[M-H]-；1H-NMR（Pyr-d5，500MHz）δ：0.82（3H，s，19-Me），0.97（3H，s，18-Me），0.97（3H，s，30-Me），1.01（3H，s，29-Me），1.32（3H，s，28-Me），1.63（3H，s，26-Me），1.65（3H，s，21-Me），1.68（3H，s，27-Me），4.96（1H，d，J=7.8Hz，Glc1-H-1），5.16（1H，d，J=7.8Hz，Glc2-H-1），5.33（1H，brt，J=7.0Hz，H-24），5.69[1H，d，J=1.6Hz，Ara（f）-H-1]；13C-NMR（Pyr-d5，125MHz）数据见表1。以上数据与文献[9]中数据一致，故鉴定为notoginsenosideFe。
化合物6白色无定形粉末（甲醇），mp189～190℃。Liebermann-Burchard和Molish反应呈阳性，10%硫酸-乙醇显紫红色。ESI-MSm/z939[M+Na]+，915[M-H]-；1H-NMR（Pyr-d5，500MHz）δ：0.82（3H，s，19-Me），0.97（3H，s，18-Me），0.98（3H，s，30-Me），1.01（3H，s，29-Me），1.32（3H，s，28-Me），1.63（3H，s，26-Me），1.66（3H，s，21-Me），1.67（3H，s，27-Me），4.96（1H，d，J=7.8Hz，Glc1-H-1），5.01[1H，d，J=6.2Hz，Ara（p）-H-1]，5.15（1H，d，J=7.8Hz，Glc2-H-1），5.34（1H，brt，J=7.0Hz，H-24）；13C-NMR（Pyr-d5，125MHz）数据见表1。以上数据与文献[10]中数据一致，故鉴定为人参皂苷Rd2。
化合物7白色无定形粉末（甲醇），mp193～194℃。Liebermann-Burchard和Molish反应呈阳性，10%硫酸-乙醇显紫红色。ESI-MSm/z939[M+Na]+，915[M-H]-；1H-NMR（Pyr-d5，500MHz）δ：0.83（3H，s，19-Me），0.97（3H，s，18-Me），1.00（3H，s，30-Me），1.01（3H，s，29-Me），1.32（3H，s，28-Me），1.62（3H，s，26-Me），1.67（3H，s，21-Me），1.67（3H，s，27-Me），4.75（1H，d，J=7.6Hz，Glc1-H-1），4.96（1H，d，J=7.8Hz，Xly-H-1），5.15（1H，d，J=7.8Hz，Glc2-H-1），5.34（1H，brt，J=7.0Hz，H-24）；13C-NMR（Pyr-d5，125MHz）数据见表1。以上据与文献[11]中数据一致，故鉴定为gypenosidenIX。[参考文献]
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