中医职称论文小叶臭黄皮中单萜和倍半萜类成分研究

发布时间：2014-06-11 14:56所属分类：临床医学论文浏览：1次加入收藏

小叶臭黄皮ClausenaexcavataBurm.f.是芸香科Rutaceae黄皮属植物，主要分布在越南、老挝、柬埔寨、缅甸、印度和我国南方地区[1-2]。其根、叶入药，用于治疗感冒发烧、痢疾、肠炎、尿道炎等[3]。 [摘要]研究小叶臭黄皮Clausenaexcavata茎和叶甲醇提取物的单萜

　　小叶臭黄皮ClausenaexcavataBurm.f.是芸香科Rutaceae黄皮属植物，主要分布在越南、老挝、柬埔寨、缅甸、印度和我国南方地区[1-2]。其根、叶入药，用于治疗感冒发烧、痢疾、肠炎、尿道炎等[3]。

　　[摘要]研究小叶臭黄皮Clausenaexcavata茎和叶甲醇提取物的单萜和倍半萜类成分。小叶臭黄皮茎和叶提取物的乙酸乙酯部位经硅胶、RP-18和HPLC等色谱技术分离纯化，通过理化常数和波谱数据鉴定化合物的结构。从小叶臭黄皮茎和叶中分离得到10个化合物，分别鉴定为：1个单萜，命名为excamonoterpene（1）；9个倍半萜，即（6R，9S）-9，10-dihydroxy-4-megastigmen-3-one（2），（3R，6R，7E）-3-hydroxy-4，7-megastigmadien-9-one（3），（3S）-3-hydroxy-7，8-dihydro-β-ionone（4），（3S，5R，6S）-3-hydroxy-5，6-epoxy-β-ionone（5），（6R，9R）-9-hydroxy-4-megastigmen-3-one（6），（3S，5R）-dihydroxy-6，7-megstigmadien-9-one（7），（-）-loliolide（8），caryolane-1，9α-diol（9），2，6-dihydroxyhumula-3（12），7（13），9（E）-triene（10）。化合物1为1个新的单萜，2～10为首次从该种植物中分离得到。

　　[关键词]中医职称论文,芸香科,小叶臭黄皮,单萜,倍半萜

　　据报道黄皮属植物含有香豆素[4-5]、生物碱[6-8]、苯丙素[9]、四降三萜[10]、黄酮[11]等。之前已报道了小叶臭黄皮的香豆素和生物碱成分[12-13]。本文对小叶臭黄皮茎和叶的化学成分进行继续研究，从中分离鉴定了10个单萜和倍半萜化合物，1为1个新的单萜，2～10为首次从该种植物中分离得到。

　　1材料

　　BrukerAM-400型核磁共振波谱仪；VGAutospec-3000质谱仪；HoribaSEPA-300数字式旋光仪；Bio-RadFTS-135红外光谱仪；ShimadzuUV-2401A紫外光谱仪；Agilent1100高效液相色谱仪，ZorbaxEclipseXDB-C18（Agilent，9.4mm×250mm，2mL・min-1）色谱柱；柱色谱硅胶（100～200，200～300目）、薄层色谱硅胶板均为青岛裕民源硅胶试剂厂产品；反向材料LichroprepRP-18（40～63μm）为Merk公司产品；所用试剂均为化学纯或分析纯。

　　小叶臭黄皮风干的茎和叶（32kg）于2010年采自云南省西双版纳，植物标本由中国科学院昆明植物研究所税玉民研究员鉴定为芸香科黄皮属植物小叶臭黄皮C.excavata。

　　2提取与分离

　　小叶臭黄皮风干的茎和叶（32kg），粉碎后用95%工业甲醇回流提取3次，每次35L×3h，减压浓缩得到甲醇提取物。加水悬浮后，依次用石油醚、乙酸乙酯和正丁醇等体积各萃取3次（15L×3次），回收溶剂得到石油醚部分、乙酸乙酯部分和正丁醇部分。将乙酸乙酯部分（1.1kg）用石油醚-丙酮混合溶剂溶解吸附于等量硅胶上，在室温下挥干溶剂经硅胶（100～200目）色谱柱分离，以石油醚-丙酮（10∶1，5∶1，4∶1，3∶1，2∶1，1∶1，0∶1）梯度洗脱，再换为氯仿-甲醇（8∶2～1∶1）。经TLC5%浓硫酸-无水乙醇显色后合并为7个部分：Fr.1～7。Fr.4（34g）经硅胶（200～300目）柱色谱，以石油醚-丙酮（5∶1～1∶2）梯度洗脱得到6个部分Fr.4-1～Fr.4-6。Fr.4-2（98mg）经反相RP-18色谱柱，以甲醇-水（30%～100%）梯度洗脱得到3个部分Fr.4-2-1～Fr.4-2-3。Fr.4-2-1经HPLC分离和纯化，以甲醇-水（52%）梯度洗脱得到化合物9（7mg，tR=26min）和3（13mg，tR=32min）。Fr.4-2-2经HPLC分离和纯化，以48%甲醇梯度洗脱得到化合物4（9mg，tR=28min）和8（12mg，tR=35min）。Fr.4-2-3经HPLC分离和纯化，以46%甲醇梯度洗脱得到化合物5（11mg，tR=23min），6（10mg，tR=31min）和10（8mg，tR=37min）。Fr.6（52g）经硅胶（200～300目）柱色谱，以石油醚-丙酮（5∶1，4∶1，3∶1，2∶1，1∶1，0∶1）梯度洗脱得到5个部分Fr.6-1～Fr.6-5，Fr.6-2（1.1g）经反相RP-18色谱柱，以甲醇-水（30%～100%）梯度洗脱得到3个部分Fr.6-2-1～Fr.6-2-3。Fr.6-2-1（230mg）经HPLC分离和纯化，以45%甲醇梯度洗脱得到化合物7（180mg，tR=25min），1（5mg，tR=30min）和2（11mg，tR=38min）。

　　3结构鉴定

　　化合物1为淡黄色油状物；[α]24.7D-16.7（c0.23，MeOH）；UV（MeOH）λmax（lgε）：208（3.97），284（2.79）；IR（KBr）：3427，2955，2929，2888，1755，1659，1631，1451，1438，1386，1348，1252，1209，1191，1101，1088，1046，866cm-1，显示有羟基、羰基的存在；ESI-MS显示其准分子离子峰为m/z221[M+Na]+，结合HR-EI-MSm/z198.0892（M+・），计算值198.0892，推出分子式为C10H14O4，不饱和度Ω=4。化合物的1H-NMR谱显示有1个不饱和质子信号峰（δH7.30，1H，d，J=1.2Hz），2个甲基单峰（δH1.87，3H，s；1.39，3H，s）。13C-NMR和DEPT显示10个碳原子信号：1个羰基碳（δC176.2，s），2个不饱和碳（δC151.6，d；130.3，s），2个甲基（δC17.0，q；10.5，q），2个亚甲基（δC61.6，t，与氧相连；43.6，t），2个次甲基（δC80.4，d；65.2，d；分别与氧相连）和1个季碳（δC59.5，s，与氧相连）。结合不饱和度Ω=4推断该化合物中还存在2个环。1H-1HCOSY谱给出H-8（δH2.94）/H-9（δH3.75，3.59）；H-5（δH5.16）/H-4（δH7.30），H-6（δH1.97，1.72）相关。HMBC给出（H-9，8，6）/C-7；H-6/（C-4，8，11）；H-11/（C-7，8）相关，并结合1H-1HCOSY谱中H-8/H-9相关和不饱和度，表明化合物中存在1个结构片段。HMBC谱还给出H-4/（C-3，10）；H-10/（C-2～4）相关，以及1H-1HCOSY谱中H-5/H-4相关，结合Ω=4表明化合物中还存在1个结构片段。综合以上分析，并结合分子量和不饱和度，化合物1的结构见图1，命名为excamonoterpene。化合物1的2DNMR主要相关图见图1。化合物11H-NMR（CD3OD，400MHz）δ：7.30（1H，d，J=1.2Hz，H-4），5.16（1H，m，H-5），3.75（1H，dd，J=12.2，4.5Hz，H-9a），3.59（1H，dd，J=12.2，6.4Hz，H-9b），2.94（1H，m，H-8），1.97（1H，dd，J=14.3，4.7Hz，H-6a），1.87（3H，s，H-10），1.72（1H，dd，J=14.3，8.9Hz，H-6b），1.39（3H，s，H-11）；13C-NMR（CD3OD，100MHz）δ：176.2（s，C-2），151.6（d，C-4），130.3（s，C-3），80.4（d，C-5），65.2（d，C-8），61.6（t，C-9），59.5（s，C-7），43.6（t，C-6），17.0（q，C-11），10.5（q，C-10）。

　　化合物2淡黄色油状物；[α]25.9D+75.4（c0.23，MeOH），ESI-MSm/z249[M+Na]+。1H-NMR（CD3OD，400MHz）δ：5.71（1H，s，H-4），3.56（1H，brs，H-9），3.47（1H，dd，J=10.5，4.3Hz，H-10b），3.41（1H，m，H-10a），2.36（1H，d，J=17.0Hz，H-2b），2.00（3H，s，H-13），1.97（1H，brs，H-7b），1.95（1H，brs，H-6），1.89（1H，d，J=17.0Hz，H-2a），1.63（1H，m，H-8b），1.48（1H，m，H-7a），1.45（1H，m，H-8a），1.06（3H，s，H-11），0.98（3H，s，H-12）；13C-NMR（CD3OD，100MHz）数据见表1。以上数据与文献[14]的报道一致，故鉴定该化合物为（6R，9S）-9，10-dihydroxy-4-megastigmen-3-one。

　　化合物3淡黄色油状物；[α]21.1D+15.3（c0.24，MeOH），EI-MSm/z208（M+・）。1H-NMR（CDC13，400MHz）δ：6.54（1H，dd，J=15.8，9.9Hz，H-7），6.10（1H，d，J=15.8Hz，H-8），5.63（1H，brt，J=1.3Hz，H-4），4.26（1H，brs，H-3），2.50（1H，d，J=9.9Hz，H-6），2.26（3H，s，H-10），1.84（1H，dd，J=13.5，5.9Hz，H-2b），1.62（3H，s，H-13），1.39（1H，dd，J=13.5，6.9Hz，H-2a），1.03（3H，s，H-11），0.89（3H，s，H-12）；13C-NMR（CDCl3，100MHz）数据见表1。以上数据与文献[15-16]的报道一致，故鉴定该化合物为（3R，6R，7E）-3-hydroxy-4，7-megastigmadien-9-one。

　　化合物4淡黄色油状物；[α]21.7D-27.1（c0.27，MeOH），ESI-MSm/z233[M+Na]+。1H-NMR（CDCl3，400MHz）δ：3.91（1H，m，H-3），2.45（2H，brs，H-8），2.25（2H，brs，H-7），2.13（3H，s，H-10），1.91（2H，m，H-4），1.67（1H，m，H-2b），1.58（3H，s，H-13），1.37（1H，m，H-2a），1.02（3H，s，H-11），1.00（3H，s，H-12）；13C-NMR（CDC13，100MHz）数据见表1。以上数据与文献[17-18]的报道一致，故鉴定该化合物为3S-3-hydroxy-7，8-dihydro-β-ionone。

　　化合物5淡黄色油状物；[α]21.1D-69.8（c0.20，MeOH），ESI-MSm/z247[M+Na]+。1H-NMR（CDC13，400MHz）δ：7.06（1H，d，J=15.8Hz，H-7），6.27（1H，d，J=15.8Hz，H-8），3.89（1H，m，H-3），2.37（1H，dd，J=14.1，1.7Hz，H-4a），2.36（3H，s，H-10），1.65（1H，dd，J=14.1，9.0Hz，H-4b），1.61（1H，dd，J=12.7，1.7Hz，H-2a），1.25（1H，dd，J=12.7，10.7Hz，H-2b），1.18（3H，s，H-13），1.17（3H，s，H-12），0.97（3H，s，H-11）；13C-NMR（CDC13，100MHz）数据见表1。以上数据与文献[19-21]的报道一致，故鉴定该化合物为（3S，5R，6S）-3-hydroxy-5，6-epoxy-β-ionone。

　　化合物6淡黄色油状物；[α]21.1D+9.8（c0.20，MeOH），ESI-MSm/z233[M+Na]+。1H-NMR（CDCl3，400MHz）δ：5.80（1H，s，H-4），3.82（1H，m，H-9），2.48（1H，d，J=16.9Hz，H-2b），1.98（1H，d，J=16.9Hz，H-2a），1.97（1H，m，H-6），1.81（1H，m，H-7b），1.68（1H，m，H-8b），1.67（1H，m，H-7a），1.61（1H，m，H-8a），1.25（3H，d，J=6.3Hz，H-10），1.07（3H，s，H-13），1.02（3H，s，H-12），1.09（3H，s，H-11）；13C-NMR（CDCl3，100MHz）数据见表1。以上数据与文献[22]的报道一致，故鉴定该化合物为（6R，9R）-9-hydroxy-4-megastigmen-3-one。化合物7黄色油状物；[α]21.2D-49.9（c0.62，MeOH），ESI-MSm/z247[M+Na]+。1H-NMR（CD3OD，400MHz）δ：5.83（1H，s，H-8），4.21（1H，m，H-3），2.17（1H，m，H-4a），1.93（1H，m，H-2a），1.39（1H，m，H-2b），1.38（1H，m，H-4b），2.19，1.40，1.40，1.15（各3H，-CH3×4）；13C-NMR（CD3OD，100MHz）数据见表1。以上数据与文献[23-24]的报道一致，故鉴定该化合物为（3S，5R）-dihydroxy-6，7-megstigmadien-9-one。

　　化合物8淡黄色油状物；[α]21.3D-66.8（c0.18，MeOH），EI-MSm/z196（M+・）。1H-NMR（CDCl3，400MHz）δ：5.70（1H，s，H-7），4.34（1H，d，J=3.7Hz，H-3），2.48（1H，dt，J=13.9，2.6Hz，H-4b），2.00（1H，dt，J=14.6，2.6Hz，H-2b），1.80（1H，dd，J=13.9，4.0Hz，H-4a），1.79（3H，s，H-11），1.54（1H，dd，J=14.6，3.7Hz，H-2a），1.48（3H，s，H-10），1.28（3H，s，H-9）；13C-NMR（CDC13，100MHz）数据见表1。以上数据与文献[25]的报道一致，故鉴定该化合物为（-）-loliolide。

　　化合物9淡黄色油状物；[α]21.1D-4.2（c0.22，MeOH），ESI-MSm/z261[M+Na]+。1H-NMR（CD3OD，400MHz）δ：3.37（1H，m，H-9），2.42（1H，ddd，J=11.4，7.5，4.2Hz，H-2），1.94（1H，m，H-11a），1.80（1H，m，H-10b），1.79（1H，m，H-3b），1.78（1H，m，H-12a），1.77（1H，m，H-5），1.63（1H，m，H-10a），1.57（1H，m，H-3a），1.45（1H，m，H-7b），1.38（2H，m，H-6），1.37（1H，brd，J=13.6Hz，H-12b），1.29（1H，m，H-11b），1.12（3H，s，H-14），1.03（1H，dd，J=13.9，12.6Hz，H-7a），0.94（3H，s，H-15），0.87（3H，s，H-13）；13C-NMR（CD3OD，100MHz）数据见表1。以上数据与文献[26]的报道一致，故鉴定该化合物为caryolane-1，9α-diol。

　　化合物10淡黄色油状物；[α]21.1D-2.7（c0.20，MeOH），ESI-MSm/z259[M+Na]+。1H-NMR（CDCl3，400MHz）δ：5.59（1H，d，J=15.9Hz，H-10），5.55（1H，s，H-12a），5.45（1H，m，H-9），5.30（1H，s，H-13a），5.04（1H，s，H-12b），5.03（1H，s，H-13a），4.38（1H，dd，J=8.9，4.7Hz，H-6），4.35（1H，s，H-2），3.23（1H，dd，J=13.8，7.8Hz，H-8a），2.81（1H，dd，J=13.8，8.4Hz，H-8b），2.27（2H，m，H-4），2.16（1H，m，H-5a），2.00（1H，dd，J=14.0，5.4Hz，H-1a），1.93（1H，m，H-5b），1.88（1H，dd，J=14.0，2.1Hz，H-1b），1.09（3H，s，H-14），1.01（3H，s，H-15）；13C-NMR（CDCl3，100MHz）数据见表1。以上数据与文献[27]的报道一致，故鉴定该化合物为2，6-dihydroxyhumula-3（12），7（13），9（E）-triene。

　　[参考文献]

　　[1]吴征镒，陈书坤，朱维明，等.云南植物志[M].北京：科技出版社，1997：768.

　　[2]中国科学院中国植物志编辑委员会.中国植物志.第43卷.第2册[M].北京：科学出版社，1999：128.

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